东盛生物(Dongsheng Biotech)
Guangzhou Dongsheng Biotech Co., Ltd.
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热启动PCR的优势
2022.09.22 点击1788次

聚合酶链式反应(PCR)由1983年美国Mullis首先提出设想,到至今,PCR已发展到第三代技术。

PCR扩增流程图:

在传统的PCR反应中,利用冰上配制反应体系,来尽量避免Taq酶在常温有部分活性的问题,来解决引物错配和二聚体引起的非特异性扩增等现象,但是无法完全解决非特异性产物,造成实验结果的不准确性。热启动型PCR能够很好的解决上述问题,是最常用的提高PCR特异性的方法。

热启动PCR(hot start PCR)是指DNA聚合酶只有在样品温度至少超过70℃时才发挥作用的PCR。通过这种方式控制PCR反应的必须组分DNA聚合酶,直到反应混合物被加热到可以阻止非特异引导和引物聚合的温度后,再启动PCR达到有效扩增特异性PCR产物的目的。

抗体法修饰热启动酶原理图:

热启动PCR的应用方面较为广泛,不仅有效防止非特异性PCR产物,而且在较难扩增的PCR反应如单拷贝基因的扩增、多重PCR和超长片段的扩增等应用尤为突出,大大改观了传统PCR技术的局限性。在病原微生物检测、遗传病诊断和法医鉴定等各个领域等实际应用中颇为广泛。在应对全球爆发的新冠疫情方面,热启动酶亦贡献颇多。目前市面上应用于SARS-Cov-2的一步法RT-qPCR检测试剂的核心酶基本都是抗体法热启动酶。

自2022年9月起,东盛生物PCR预混液系列半岛bd体育手机客户端 全新升级至热启动版本!

东盛一管式PCR预混液不仅使用方便,而且性能优异,通过抗体修饰的热启动改造进一步提升了半岛bd体育手机客户端 的特异性和扩增效率等性能。

部分半岛bd体育手机客户端 升级对比图

高保真PCR--Pfu Mix——在保证保真度的基础上显著提高PCR扩增效率:

高效率PCR--Plus Mix——在原有高扩增效率的基础上进一步提高特异性:

染料法qPCRMix——抗体修饰升级,曲线更完美:

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